• 亲和分析影响因素

    親和分析影響因素。

      。親和層析。利用固定相的固定相結合特性分離分子的色譜方法。親和分析在凝膠過濾色譜柱上連接具有一定組合能力的分子,當流相條件發生變化時,可以相互分離??捎糜趶幕旌衔镏屑兓驖饪s分子,或去除或減少混合物中分子的含量。

      特殊應用。

      親和分析廣泛應用于從細胞提取物中分離和純化核酸和蛋白質,或從血漿中分離抗體。分離蛋白常用于親和層析。通過基因修飾,為蛋白質添加一些人工特性,使蛋白質有選擇地與配體結合,從而達到分離的目的。親和分析的另一個主要用途是從血漿中分離抗體。

      影響因素。

      1.上樣體積。

      假如目標產品與配體的結合效果很強,上樣量對親和層析效應影響不大。若結合力較弱,樣品濃度應較高,上樣量不得超過柱負荷的5%~10%。(負載是指色譜柱吸附的配體量)。

      2.柱長。

      根據親和介質的性質,需要確定親和柱的長度。如果親和介質負載高,與目標產品(目標)相互作用強,可選擇較短的珠(柱);相反,應增加柱的長度,以確保目標產品與親和介質有足夠的相互作用時間。

      3.流速。

      在親和吸附過程中,需要一個緩慢的過程來實現目標產要緩慢的過程。因此,樣品在柱上的流量應盡可能慢,以確保目標產品有足夠的時間與配體結合,特別是當它們之間的結合力較弱,樣品濃度過高時。

      4.溫度。

      溫度效應在親和分析中非常重要,親和介質的吸附能力受溫度的影響,因此可以用不同的溫度進行吸附和洗脫。一般親和介質的吸附能力隨著溫度的升高而降低,因此可以選擇較低的溫度,使分離物質與配體有更大的親和力,充分結合;然而,當洗滌時間較高時,分離物質與配體之間的親和力降低,便于分離物質從配體中脫落。例如,一般吸附在4℃解吸25℃進行。



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